Анти-D смесь
(моноклональное, человеческий иммуноглобулин класса G + иммуноглобулин класса М)
ЦЕЛЕВОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
Моноклональная Анти-D смесь - реагент, производимый из культуры клеток супернатантов гетерогибридомы-клеточных линий. Одна клеточная линия секретирует антитело иммуноглобулин класса G-типа, а другая антитело иммуноглобулин класса М-типа. Реагент используют, чтобы определить, обладают ли эритроциты человека соответствующим антигеном D группы крови. Этот реагент вступает в реакцию отрицательно с эритроцитами категории DVI с антителом иммуноглобулин класса М и положительно с антителом иммуноглобулин класса G в косвенной пробе Кумбса. Реагент предназначен для использования только квалифицированным и техническим персоналом.
ПРИНЦИП ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ДЕЙСТВИЙ
Процедуры, с использованием этого реагента основаны на принципе агглютинации. Нормальные эритроциты человека, обладающие соответствующим антигеном будут агглютинировать в присутствии специфического антитела, направленного к антигену.
РЕАГЕНТЫ
Указанный реагент содержит антитела следующих клеточных клонов:
Анти-D смесь (моноклональное, человеческий иммуноглобулин класса G + иммуноглобулин класса М, клоны MS-26; TH-28)
Реагент содержит <0,1% (вес / объем) азида натрия в качестве консерванта. Дополнительно реагент получают из активных антител, хлорида натрия, макромолекул и бычьего альбумина.
ВНИМАНИЕ
Этот реагент были подготовлен из супернатантов клеточных культур. Тем не менее, в роли биопрепарата его следует рассматривать как потенциально инфекционный из-за существования опасности через возбудителей заболевания. Реагент содержит азид натрия, который может быть токсичным и может вступать в реакцию со свинцом или медью для образования взрывоопасных солей. При утилизации, промойте большим количеством воды. С реагентом необходимо обращаться с осторожностью по причинам упомянутым выше.
ТРЕБОВАНИЯ ПО ХРАНЕНИЮ
Продукты в открытом и закрытом состоянии следует хранить при температуре от + 2 до + 8°C. Тогда как при использовании (от + 15 до +30 °C). Необходимо хранить и использовать реагенты только до указанного срока годности.
ПРИМЕЧАНИЯ
- Дозировка положительных реакций также зависит от возраста, используемой крови.
- При каждом положительном и отрицательном тестировании, должна быть выполнена проверка.
- Неправильное хранение ухудшает эффективность реагента.
- Центрифугирование сильно отличается от определенной относительной центробежной силы, что может привести к неправильным результатам.
- Образцы крови для испытания должны быть использованы как можно скорее. Если происходит задержка при тестировании, образцы должны храниться от + 2 до + 8°C.
- Процедуры, определенные ниже, предназначены только для ручного тестирования. При использовании автоматических или полуавтоматических инструментов, следуйте указаниям, которые содержатся в руководстве по эксплуатации, предоставляемом с устройством от производителя. Лаборатории должны следовать утвержденным процедурам проверки, чтобы продемонстрировать совместимость этого продукта на автоматизированных системах.
- В целях использования этого реагента, все действующие национальные законы, директивы и норы, должны соблюдаться, особенно в Германии „Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie)“.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТА
Подготовки реагента не требуется. Используйте реагент непосредственно из флакона.
ПОРЯДОК ДЕЙСТВИЯ
Не требуется дополнительного материала
Предметный метод: Предметное стекло; пипетка Пастера; тест-полоска для смешивания
При Методе центрифугирования пробирки: Пробирки для тестирования, 10 х 75 мм или 12 х 75 мм; микролитровые пипетки; центрифуга; изотонический раствор (0,85 - 0,9% хлорид натрия); анти-человеческий-глобулин-сыворотки
Метод испытания Метод с использованием стекла
- Используйте только осадок эритроцитов или цельную кровь.
- Поместите одну каплю (приблизительно 50 мкл) реагента на предметное стекло.
- С помощью пипетки Пастера добавьте одну каплю осадка эритроцитов или цельной крови (приблизительно 50 мкл) на предметное стекло.
- Смешайте тщательно эритроциты с реагентом палочкой и распределите по окружности (диаметр 2 см)
- Слегка вращая стекло, проверьте склеивание в течение 1 минуты (реакция начинается в течение нескольких секунд). Могут появляться неспецифические реакции из-за высыхания реактивного образования или, если стекло нагрето. Запишите результат.
Метод центрифугирования трубки
- Используйте суспензию только от 2 до 5% эритроцитов в изотоническом растворе (клетки промываются от одного до трех раз изотоническим солевым раствором).
- Добавить 100 мкл (альтернативный подход: одна капля = приблизительно 50 мкл) соответствующей клеточной суспензии в каждую пробирку.
- Добавить 100 мкл (альтернативный подход: одна капля = примерно 50 мкл) соответствующей взвеси отмытых клеток в каждую пробирку.
- Тщательно перемешать, слегка встряхивая.
- Выдержать пробирку при комнатной температуре (от +15 до +30 °C) в течение 1-15 мин.
- Центрифугирование пробирки должно проходить в течение 1 мин при 2,000 оборотов в минуту (приблизительно 800-1,000 г).
- Аккуратно ресуспендируйте эритроциты и проверьте макроскопически для склеивания в течение 3 минут Запишите результат.
Непрямая проба Кумбса
- Повторите с 1 до 4 шага со свежим материалом или продолжите после прочтения результата напрямую.
- Инкубируйте трубку при 37 ° С в течение 30 мин.
- Промойте эритроциты 3 раза с (холодным) изотоническим солевым раствором.
- Добавьте 100 мкл анти-человеческого-глобулина-сыворотки (Кумбс-сыворотка) в каждую пробирку
- Центрифугирование трубки в течение 1 мин при 1,000 оборотов в минуту (приблизительно 180-270 мкг).
- Аккуратно ресуспендируйте эритроциты и проверьте макроскопически для склеивания в течение 3 минут. Запишите результат.
ТРАКТОВКА АНАЛИЗА
«Немного вращайте/встряхивайте» при методе с использованием стекла / при методе центрифугирования пробирки:
Положительные результаты (+): видимые агглютинации эритроцитов означают положительный результат и свидетельствуют о наличии соответствующего антигена. Отрицательные результаты (-): Если нет видимой агглютинации эритроцитов, это является отрицательным результатом и свидетельствует об отсутствии соответствующего антигена
ОГРАНИЧЕНИЯ ПОРЯДКА ДЕЙСТВИЙ
Неточности при соответствии инструкциям, которые написаны в соответствии с разделом «Последовательность действий» и «Толкование результатов» могут приводить к неправильным результатам.
Не получится достичь обоснованного вывода в отношении результата теста, если будет проходить профилактика с неопределенными или ложными результатами.
Фермент, при проведении лечения эритроцитами может реагировать в неспецифической форме.
Благодаря изменчивости экспрессии антигенов, реакционная способность этих реагентов против определенных фенотипов может дать более слабую реактивность по сравнению с контрольными клетками.
Эритроциты, покрытые аллоантителами или аутоантителами такой же или подобной специфичности в качестве реагента (т.е. клетки, которые являются положительными в прямом антиглобулиновом тесте (ПАТ)) могут показать слабые реакции. В редких случаях могут произойти ложно-отрицательные результаты.
С помощью предметного метода большинство слабых D-антигенов (Dслаб) и категорий не признаются.
Этот реагент вступает в реакцию отрицательно с эритроцитами категории DVI в тесте на агглютинирование и положительно в косвенной пробе Кумбса.
Описанные процедуры для тестирования подходят для использования с Кумбс-сывороткой, производимой антитоксин GmbH. По принципу Coombs-sera могут быть использованы другие производители, но лаборатории должны следовать процедурам данного производителя. Также лаборатории должны следовать утвержденным процедурам проверки, чтобы продемонстрировать совместимость этого продукта.
Если продукты выбраны из колб объемом 1 л, то материал данного флакона должен быть использован в течение 6 месяцев.