Анти-А, Анти-B, Анти-AB
(моноклональные антитела)
ЦЕЛЕВОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
Моноклональные агглютинирующие анти-А, анти-В и анти-АВ-testsera получены из супернатантов клеточных культур от клеточных линий, относящихся к мышам. Клетки, секретирующие антитела иммуноглобулин класса М, вступающие в специфическую реакцию с соответствующим антигеном. Testsera используются для определения того, обладают ли эритроциты человека соответствующей группой антигенов крови А или B. Testsera может быть только под целевым использованием квалифицированным техническим персоналом.
ПРИНЦИП АНАЛИЗА
Процедуры, с использованием этих реагентов основаны на принципе агглютинации. Нормальные эритроциты человека, обладающие соответствующим антигеном будут агглютинировать в присутствии специфического антитела, направленного к антигену.
РЕАГЕНТЫ
Перечисленные реагенты содержат антитела следующих клеточных клонов:
Анти-А моноклональные, мышиные (клон Birma-1) анти-B моноклональные, мышиные (клон LB-2) Анти-AB моноклональные, мышиные (клоны ES-4, ES-15)
Все реагенты содержат <0,1% (вес/объем) азида натрия в качестве консерванта. Дополнительно реагенты получают из активных антител, хлорида натрия, макромолекул и бычьего альбумина.
ВНИМАНИЕ
Эти реагенты были подготовлены из супернатантов клеточных культур. Тем не менее, в роли биопрепарата его следует рассматривать как потенциально инфекционный из-за существования опасности через возбудителей заболевания. Реагенты содержат азид натрия, который может быть токсичным и может вступать в реакцию со свинцом или медью для образования взрывоопасных солей. При утилизации, промойте большим количеством воды. С реагентами необходимо обращаться с осторожностью по причинам упомянутым выше.
ТРЕБОВАНИЯ ПО ХРАНЕНИЮ
Продукты в открытом и закрытом состоянии следует хранить при температуре от + 2 до + 8°C. Тогда как при использовании от + 15 до + 30°С. Необходимо хранить и использовать реагенты только до указанного срока годности.
ПРИМЕЧАНИЯ
- Дозировка положительных реакций также зависит от возраста, используемой крови.
- При каждом тестировании должно выполняться контрольное тестирование с сывороткой. Оба результаты должны соответствовать.
- Неправильное хранение ухудшает эффективность реагента.
- Центрифугирование сильно отличается от определенной относительной центробежной силы, что может привести к неправильным результатам.
- Образцы крови для испытания должны быть использованы как можно скорее. Если возникает задержка в тестировании, то образцы должны храниться при температуре от 2 до 8 ° C. Кровь втягивается в цитрат натрия или ЭДТА и должна быть проверена в течение 14 дней.
- Процедуры, определенные ниже, предназначены только для ручного тестирования. При использовании автоматических или полуавтоматических инструментов, следуйте указаниям, которые содержатся в руководстве по эксплуатации, предоставляемом с устройством от производителя. Лаборатории должны следовать утвержденным процедурам проверки, чтобы продемонстрировать совместимость этого продукта на автоматизированных системах.
- Для использования данного testsera, все действующие национальные законы, директивы и нормы должны соблюдаться, особенно в Германии „Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie)“
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТА
Подготовка реагентов не требуется. Используйте реагенты непосредственно из флаконов.
ПОРЯДОК ДЕЙСТВИЯ
Не требуется дополнительного материала
Предметный метод: Предметное стекло; пипетка Пастера; тест-полоска для смешивания
При методе центрифугирования: пробирки, 10 х 75 мм или 12 х 75 мм; микролитровые пипетки; центрифуга; изотонический раствор (0,85 - 0,9% хлорид натрия)
Метод испытания Метод с использованием стекла
- Используйте только осадок эритроцитов или цельную кровь.
- Поместите одну каплю (приблизительно 50 мкл) соответствующего реагента на предметное стекло.
- С помощью пипетки Пастера добавьте одну каплю осадка эритроцитов или цельной крови (приблизительно 50 мкл) на предметное стекло.
- Хорошо смешайте эритроциты с реагентом палочкой и распределите по окружности (диаметр 2 см)
- Слегка вращая стекло, проверьте склеивание в течение 1 минуты (реакция начинается в течение нескольких секунд). Запишите результат. Могут появляться неспецифические реакции из-за высыхания реактивного образования или, если стекло нагрето.
Метод центрифугирования пробирки
- Используйте суспензию только от 2 до 5% эритроцитов в изотоническом растворе (клетки промываются от одного до трех раз изотоническим солевым раствором).
- Добавить 100 мкл (альтернативный подход: одна капля = приблизительно 50 мкл) соответствующей клеточной суспензии в каждую пробирку.
- Добавить 100 мкл (альтернативный подход: одна капля = примерно 50 мкл) соответствующей взвеси отмытых клеток в каждую пробирку.
- Тщательно перемешать, слегка встряхивая.
- Выдержать пробирку при комнатной температуре (от +15 до +30 °C) в течение 1-15 мин.
- Центрифугирование пробирки должно проходить в течение 1 мин при 1000 оборотов в минуту (приблизительно 180-270 г).
- Аккуратно ресуспендируйте эритроциты и проверьте макроскопически для склеивания в течение 3 минут. Запишите результат.
ТРАКТОВКА АНАЛИЗА
«Слегка вращайте/встряхивайте» при методе с использованием стекла / по методу центрифугирования пробирки:
Положительные результаты (+): видимое склеивание эритроцитов представляет положительный результат и показывает присутствие соответствующего антигена. Отрицательные результаты (-): отсутствие видимого склеивания эритроцитов представляет отрицательный результат и показывает отсутствие соответствующего антигена.
ОГРАНИЧЕНИЯ ПОРЯДКА ДЕЙСТВИЙ
- Неточности при соответствии инструкциям, которые написаны в соответствии с разделом «Последовательность действий» и «Толкование результатов» могут приводить к неправильным результатам.
- Не получится достичь обоснованного вывода в отношении результата теста, если будет проходить профилактика с неопределенными или ложными результатами.
- Фермент, при проведении лечения эритроцитами может реагировать в неспецифической форме.
- Благодаря изменчивости экспрессии антигенов, реакционная способность этих реагентов против определенных фенотипов может дать более слабую реактивность по сравнению с контрольными клетками. Анти-A не будет вступать в реакцию со всеми Ax-пробами крови.
- Эритроциты, покрытые аллоантителами или аутоантителами такой же или подобной специфичности в качестве реагента (т.е. клетки, которые являются положительными в прямом антиглобулиновом тесте (ПАТ)) могут показать слабые реакции. В редких случаях могут произойти ложноотрицательные результаты.
- Testserum анти-В не вступают в реакцию с «приобретенным B».
- Если продукты выбраны из колб объемом 1 л, то материал данного флакона должен быть использован в течение 6 месяцев.